本標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.271-2016代替GB/T 21911-2008《食品中鄰苯二甲酸酯的測定》和SN/T 3147-2012《出口食品中鄰苯二甲酸酯的測定》。
本標(biāo)準(zhǔn)與GB/T 21911-2008相比,主要變化如下:
———標(biāo)準(zhǔn)名稱修改為“食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中鄰苯二甲酸酯的測定”;

1.范圍: 食品中鄰苯二甲酸酯的測定第yi法規(guī)定了食品中16種鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)含量的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)的測定方法;第er法規(guī)定了食品中18種鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)含量的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)的測定方法。

食品中鄰苯二甲酸酯的測定第一法適用于食品中鄰苯二甲酸二甲酯(DMP)等16種鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)含量的內(nèi)標(biāo)法測定和確證;第er法適用于食品中鄰苯二甲酸二甲酯(DMP)等18種鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)含量的外標(biāo)法測定和確證。

2.原理:  在試樣中加入氘代的鄰苯二甲酸酯作為內(nèi)標(biāo),各類食品經(jīng)提取、凈化后經(jīng)氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行測定。采用特征選擇離子監(jiān)測掃描模式(SIM),以保留時間和定性離子碎片的豐度比定性,同位素內(nèi)標(biāo)法定量。

3.試劑材料:  除非另有說明,本方法所用試劑均為色譜純,水為GB/T6682規(guī)定的二級水。

3.1試劑

3.1.1正己烷(C6H14)。3.1.2乙腈(C2H3N)。3.1.3丙酮(CH3COCH3)。3.1.4二氯甲烷(CH2Cl2)。3.2標(biāo)準(zhǔn)品

 3.2.1  16種鄰苯二甲酸酯類標(biāo)準(zhǔn)品:  鄰苯二甲酸二甲酯(DMP)等混合液體標(biāo)準(zhǔn)品,濃度為1000μg/mL。

 3.2.2  16種氘代同位素的鄰苯二甲酸酯內(nèi)標(biāo)：  D4-鄰苯二甲酸二甲酯(D4-DMP)等，純度>99%。

 3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

3.3.1  16種鄰苯二甲酸酯標(biāo)準(zhǔn)中間溶液(10μg/mL):準(zhǔn)確移取鄰苯二甲酸酯標(biāo)準(zhǔn)品(1000μg/mL)1mL至100mL容量瓶中,用正己烷準(zhǔn)確定容至刻度。

3.3.2  16種氘代同位素的鄰苯二甲酸酯內(nèi)標(biāo)溶液(100μg/mL):準(zhǔn)確稱取16種氘代同位素的鄰苯二甲酸酯內(nèi)標(biāo)各0.01g(精que到0.0001g)于100mL容量瓶中,用正己烷溶解并準(zhǔn)確定容至刻度。

3.3.3  16種氘代同位素的鄰苯二甲酸酯內(nèi)標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)使用液(10μg/mL):準(zhǔn)確移取16種氘代同位素的鄰苯二甲酸酯內(nèi)標(biāo)(100μg/mL)10mL于100mL容量瓶中,加入正己烷并準(zhǔn)確定容至刻度。

3.3.4  16種鄰苯二甲酸酯標(biāo)準(zhǔn)系列工作液:準(zhǔn)確吸取16種鄰苯二甲酸酯標(biāo)準(zhǔn)中間溶液(10μg/mL),用正己烷逐級稀釋,配制成濃度為0.00μg/mL、0.02μg/mL、0.05μg/mL、0.10μg/mL、0.20μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液,同時加入內(nèi)標(biāo)使用液(10μg/mL),使內(nèi)標(biāo)濃度均為0.125μg/mL,臨用時配制。

 4.儀器和設(shè)備  注:所用玻璃器皿洗凈后,用重蒸水淋洗3次,丙酮浸泡lh,在200℃下烘烤2h,冷卻至室溫備用。

4.1氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)；4.2分析天平:精度0.0001g；4.3氮吹儀；4.4渦旋振蕩器；4.5超聲波發(fā)生器；4.6離心機(jī):轉(zhuǎn)速≥4000r/min

4.7粉碎機(jī)；4.8 SimplyLab固相萃取(SPE)裝置；4.9固相萃取柱:PSA/Silica復(fù)合填料玻璃柱(1000mg,6mL) 

5.分析步驟

5.1  試樣制備

5.1.1 液態(tài)樣品:取約200mL樣品混勻后放置磨口玻璃瓶內(nèi)待用。

5.1.2半固態(tài)和固態(tài)樣品:分別取約200g樣品經(jīng)粉碎后放置磨口玻璃瓶內(nèi)待用。

5.2  試樣處理

5.2.1  液態(tài)試樣

5.2.1.1  液態(tài)試樣A:液體乳、飲料、醬油、食醋、白酒（白酒中16種鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)檢測整體解決方案 GC/MS法）、蜂蜜等。

準(zhǔn)確稱取試樣1.0g(精que至0.0001g)于25mL具塞磨口離心管中,加入125μL同位素內(nèi)標(biāo)使用液,加入2mL~5mL蒸餾水,渦旋混勻,再準(zhǔn)確加入10mL正己烷,渦旋1min,劇烈振搖1min,超聲提取30min,1000r/min離心5min,取上清液,供GC-MS分析。

5.2.1.2 液態(tài)試樣B:植物油等。

液態(tài)油脂混勻后準(zhǔn)確稱取0.5g(精que至0.0001g)于10mL具塞磨口離心管中,加入25μL同位素內(nèi)標(biāo)使用液,依次加入100μL正己烷和2mL乙腈,渦旋1min,超聲提取20min,4000r/min離心5min,收集上清液。殘渣中加入2mL乙腈,渦旋1min,4000r/min離心5min。再加入2mL乙腈重復(fù)提取1次,合并3次上清液,待SPE凈化。

5.2.2  半固態(tài)試樣

5.2.2.1 半固態(tài)試樣A:果凍、甜面醬等：準(zhǔn)確稱取混勻試樣0.5g(精que至0.0001g)于25mL具塞磨口離心管中,加入125μL同位素內(nèi)標(biāo)使用液,加入2mL~5mL蒸餾水,渦旋混勻,再準(zhǔn)確加入10mL正己烷,渦旋1min,劇烈振搖1min,超聲提取30min,1000r/min離心5min,取上清液,供GC-MS分析。

5.2.2.2  半固態(tài)試樣B:芝麻醬、含油調(diào)味醬等：將樣品充分粉碎混勻后準(zhǔn)確稱取0.5g(精que至0.0001g)于10mL具塞磨口離心管中,加入25μL同位素內(nèi)標(biāo)使用液,加入1mL正己烷,渦旋2min,再加入5mL乙腈,渦旋1min,超聲提取20min,4000r/min離心5min,收集上清液。加入5mL乙腈重復(fù)提取1次,合并上清液。40 ℃氮氣吹干,加入6mL乙腈,渦旋混勻,待SPE凈化。

5.2.3  固態(tài)試樣

5.2.3.1  固態(tài)試樣A:乳粉、米粉、雞精、味精、干酪、糖果、花粉、肉制品、糕點、方便面、果蔬及其制品等： 準(zhǔn)確稱取混勻試樣0.5g(精確至0.0001g)于25mL具塞磨口離心管中,加入125μL同位素內(nèi)標(biāo)使用液,加入2mL~5mL蒸餾水,渦旋混勻,再準(zhǔn)確加入10mL正己烷,渦旋1min,劇烈振搖1min,超聲提取30min,1000r/min離心5min,取上清液,供GC-MS分析。

5.2.3.2  固態(tài)試樣B:黃油等：將樣品充分粉碎混勻后準(zhǔn)確稱取0.5g(精que至0.0001g)于10mL具塞磨口離心管中,加入25μL同位素內(nèi)標(biāo)使用液,加入1mL正己烷,渦旋2min,再加入5mL乙腈,渦旋1min,超聲提取20min,4000r/min離心5min,收集上清液。加入5mL乙腈重復(fù)提取1次,合并上清液。40℃氮氣吹至近干,加入6mL乙腈,渦旋混勻,待SPE凈化。

注:黃油應(yīng)融化為液態(tài)油脂混勻后稱取,并在提取過程中保持液態(tài)。

5.3  SPE凈化：依次加入5mL二氯甲烷、5mL乙腈活化,棄去流出液;將待凈化液加入SPE小柱,收集流出液;再加入5mL乙腈,收集流出液,合并兩次收集的流出液,加入1mL丙酮,40℃氮吹至近干,正己烷準(zhǔn)確定容至2mL,渦旋混勻,供GC-MS分析。

5.4  空白試驗：除不加試樣外,均按上述測定步驟進(jìn)行。注:整個操作過程中,應(yīng)避免接觸塑料制品。

5.5 儀器參考條件

5.5.1 氣相色譜參考條件

5.5.1.1 色譜柱:5%苯基-甲基聚硅氧烷石英毛細(xì)管色譜柱,柱長:30 m,內(nèi)徑:0.25 mm,膜厚:0.25μm,或性能相當(dāng)者。

5.5.1.2 進(jìn)樣口溫度:260℃。

5.5.1.3 程序升溫:初始柱溫60℃,保持1 min;以20℃/min升溫至220℃,保持1 min;再以5℃/min升溫至250℃,保持1min;再以20℃/min升溫至290℃,保持7.5min。

5.5.1.4 載氣:高純氦(純度>99.999%),流速:1.0mL/min；5.5.1.5 進(jìn)樣方式:不分流進(jìn)樣；5.5.1.6 進(jìn)樣量:1μL；5.5.2  質(zhì)譜參考條件

5.5.2.1 電離方式:電子轟擊電離源(EI);5.5.2.2 電離能量:70eV;5.5.2.3 傳輸線溫度:280℃;5.5.2.4 離子源溫度:230℃;5.5.2.5 監(jiān)測方式:選擇離子掃描(SIM),監(jiān)測離子見附錄B。5.5.2.6 溶劑延遲:7min。

5.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液分別注入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀中,以鄰苯二甲酸酯各組分及其對應(yīng)氘代同位素內(nèi)標(biāo)的峰面積比值為縱坐標(biāo),以系列標(biāo)準(zhǔn)溶液中各組分含量(μg/mL)與對應(yīng)氘代同位素內(nèi)標(biāo)含量(μg/mL)比值為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 

5.7 試樣溶液的測定：將試樣溶液注入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀中,由試樣中鄰苯二甲酸酯各組分及其內(nèi)標(biāo)峰面積比值進(jìn)行定量計算,得出試樣溶液中各組分含量(μg/mL)與對應(yīng)氘代同位素內(nèi)標(biāo)含量(μg/mL)比值。再根據(jù)試樣中加入的對應(yīng)氘代同位素內(nèi)標(biāo)含量(μg/mL)計算試樣溶液中鄰苯二甲酸酯各組分含量(μg/mL)。

5.8 定性確認(rèn)：在上述儀器條件下,試樣待測液和鄰苯二甲酸酯標(biāo)準(zhǔn)品的目標(biāo)化合物在相同保留時間處(±0.5%)出現(xiàn),并且對應(yīng)質(zhì)譜碎片離子的質(zhì)荷比與標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)譜圖一致,其豐度比與標(biāo)準(zhǔn)品相比應(yīng)符合表1,可定性目標(biāo)化合物。 

表1氣相色譜-質(zhì)譜定性確證相對離子豐度zui大容許誤差

式中:

X——試樣中鄰苯二甲酸酯的含量,單位為毫克每千克(mg/kg);

ρ ——從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線上查出的試樣溶液中鄰苯二甲酸酯的質(zhì)量濃度,單位為微克每毫升(μg/mL);

V——試樣定容體積,單位為毫升(mL);

m——試樣的質(zhì)量,單位為克(g);

1000——換算系數(shù)。

計算結(jié)果應(yīng)扣除空白值。結(jié)果大于等于1.0mg/kg時,保留三位有效數(shù)字;結(jié)果小于1.0mg/kg時,保留兩位有效數(shù)字。

7. 精密度:在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。

 8.  其他:食品中鄰苯二甲酸酯的測定的定量限為:鄰苯二甲酸二正丁酯(DBP)定量限為0.3mg/kg,除DBP外其他15種鄰苯二甲酸酯定量限均為0.5mg/kg。

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